抗原的固定

对于植物病毒材料的固定，丙酮用得最多，乙醇次之。因为丙酮对病毒的抗原性损害为最小，但对于那些不稳定的病毒，则应避免固定。

  在应用免疫酶技术时，固定处理对酶的活性的影响也得心中有数。许多固定剂对抗原的活性都 会有所损害，例如，福尔马林对蛋白抗原的固定造成抗原性的破坏非常明显。因此，对福尔马林的使用必须严格控制浓度，一般使用的福尔马林浓度为10%，尽管如此，对抗原的抗原性还是有损害，所以必须进行抗原修复。

  另外，对于碱性磷酸酶，在4℃下，丙酮固定一昼夜，能丧失30%的活性，如用丙酮固定后包埋，则丧失70%的活性；在4℃下，福尔马林固定2－4h，则丧失25%的活性。

  固定条件对标本的固定效果作用较大。

  固定剂浓度：丙酮最常用的是100%；乙醇最常用95%，但是70%乙醇的固定力为最强；福尔马林常用10%。

  固定的温度：一般而言，固定作用随温度升高而加强，室温是最常用的。固定温度可以－70－30℃。应根据不同的抗原使用不同的温度，麻疹病毒应在－20－40℃用丙酮固定30min，而酶可以37℃用乙醇固定15min.

  固定液的pH：一般以所用固定剂的pH为准，但若以酶去除某些抗原表面的蛋白衣膜时，应根据所用酶的性质调节pH。

  固定时的干湿度：干湿度一般情况下不需考虑，但某些材料在固定时受干湿度影响很大。丙酮对Hela 细胞中的灰质炎病毒固定，在室温干燥的情况下，N抗原就转变为H抗原；而在－20℃不干燥的情况下，N抗原保持不变。

  固定的时间：有长有短，一般在室温下，固定15min左右，低温下固定30min.如仅为了使材料不脱落为了减轻未处理的新鲜冰冻切片出现的空泡，则可用丙酮、乙醇和甲醛作短时间处理。

  固定后的冲洗：固定后的材料常用中性磷酸缓冲液反复冲洗，以免在固定过程中可能弥散出来的物质覆盖表面。

  固定标本的保存：标本材料经固定后，要立即使用于免疫酶技术中，不要久贮。如实在要保存，应置于冰箱（4℃）中，在干燥的情况下24h内抗原性损失不大。在－20℃下，冰冻切片或涂片可保存1周到1个月，石蜡切片可保存数月以上。在－20℃下保存时，为了防止形成过多的冰结晶并发生组织细胞的变化，应将切片浸入聚乙烯醇甘油溶液中，让其在－20℃下形成固态保护膜，然后在免疫酶染色前用手指加温，用生理盐水轻轻洗去，每次5min,共洗3次。这样保存的标本，污染增多。某些干燥标本（例如组织内阿米巴抗原、组织自身抗原）贮于辛烷中可长期保存（－30℃），并且几乎无污染。

  固定的程序很简单，将固定剂用吸管加到标本上去，或将标本置于玻片架上浸入固定剂溶液中，固定后立即用磷酸缓冲液冲洗，然后在空气中晾干或风扇吹干。