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ELISA试剂盒的OD值的判定

ELISA试剂盒的OD值的判定

酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行开端效价的滴定(见酶符号抗体部份)。

然后再固定其它条件或选用“方阵法”(包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度)在正式试验体系里精确地滴定其作业浓度。

酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选央求是价廉、安全、有明显地显色反响,而自身无色。

有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果,应留心防护。

ELISA试剂盒有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。

底物效果一段时刻后,应参加强酸或强碱以连续反响。

ELISA试剂盒一般底物效果时刻,以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制造,尤其是H2O2在临用前参加。

ELISA试剂盒进行各项试验条件的挑选是很首要的,其间包含:

固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。

其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。

不管何种载体,在运用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反响,查询其显色反响是不是均一性,据此判明其吸附功用是不是超卓。

包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,央求纯度要好,吸附时一般央求PH在9.0~9.6之间。

吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。

蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相一同,查询阳性标本的OD值。

ELISA试剂盒挑选OD值******而蛋白量起码的浓度。

对于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。

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