药物敏感试验方法
药物敏感试验简称药敏试验(或耐药试验)。旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感(或耐受)程度,以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。目前滥用抗生素,致使抗药菌增加,甚至因长期大量使用广谱抗生素,杀伤体内正常微生物,失去微生物的相互制约作用,从而使一些少见的或一般情况下的非致病菌大量繁殖,引起所谓“二次感染”的情况屡有发生,给治疗造成人为的困难。因此,提倡使用药敏试验,坚持合理用药十分重要。
目前常用的药敏试验方法有:
1. 从琼脂平板挑取形态相似的纯培养菌落接种肉汤培养基,并于35度培养至浊度达到或超过0.5麦氏单位,取出用盐水或肉汤调节菌液浓度至0.5麦氏单位,含菌量约(1-2)×108cfu/ml。也可将菌落直接悬浮于无菌盐水或肉汤内,调至0.5麦氏单位,这称为直接菌悬液法。
2. 用无菌棉拭子浸入调好的菌悬液中,将多于菌悬液在管壁挤出,在M-H琼脂平皿上划线,划满整个琼脂表面,旋转平皿60°重复划线共三次,最后一次用拭子涂抹琼脂边缘。置室温3-5分钟。
3.用纸片分配器或无菌镊子取药敏纸片,贴于平板表面,并用镊尖轻压一下纸片,使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm,纸片的中心距平板的边缘不小于15mm,90mm直径的平板适宜贴6张药敏纸片。
4. 将贴好纸片的平板置35度孵育18-24h后,用游标卡尺量取抑菌圈直径。
根据抑菌圈的大小(不同抗生素其抑菌圈大小的标准不一致),判断为敏感(S),耐药(R)或中介度(I)。
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