产品属于:
产品名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 |
比色法细胞毒性检测试剂盒 |
Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit |
1000T |
EY-01X8792 |
保存:-20℃冷冻避光。
操作步骤:
向具有黑色的侧壁和透亮底部的微型细胞培养板中每孔加入100到10000个细胞,每孔添加测试化合物,在37℃,5% CO2细胞培养箱中孵育所需要的时间(如24小时、48小时或96小时)。未加细胞的空白对照,加入相同量的化合物,建议96孔板中每孔总体积100μL,384细胞微量板中加入50μL。
同时要建立下述的实验对照组。
阳性对照组:含有细胞并已知细胞增殖或细胞毒曲线;
阴性对照组:含有细胞,不加测试化合物;
空白对照组:含有细胞,加入溶解化学试剂的溶剂;
无细胞对照组:仅含有细胞生产培养基,无细胞。
化合物测试对照组:含有溶解测试化合物的溶剂比如汉克平衡缓冲液(HBSS)或磷酸盐缓冲液(PBS)和测试化合物。某些测试化合物有很强的自荧光性,可能会导致假阳性。
注意:所有的对照组中,要用培养基保证96孔板中总体积是100μL,384微型培养板中总体积50μL。
室温解冻成分A,并使其回温至37℃,实验前彻底摇匀。
96孔细胞培养板中加入Assay Solution每孔20μL,,384微型培养板中每孔10μL,轻轻摇培养板30秒。
在37℃,5% CO2细胞培养箱中避光孵育1到24个小时。
注意:应根据不同细胞类型的代谢率和细胞浓度,确定******的孵育时间;由于过长孵育时间可能会使指示剂转变为无色的化合物,所以不推荐延长孵育时间。
分别读取570nm和605nm处的吸光值,得到OD570和OD605的比值,来计算每孔的细胞活力。
注意:补加培养基保证96孔板中每孔总体积100μL,384微型细胞培养孔中每孔总体积50μL。
数据分析:
背景荧光值是有细胞孔的荧光值和无细胞孔的值相减得到。
注意:补加培养基保证96孔板中每孔总体积100μL,384微型细胞培养孔中每孔总体积50μL。
每孔的吸光值表明了每孔的细胞数目。
下面的公式是样品细胞活力比率和相应的曲线:
% cell viability = 100×(Rsample–R0)/(Rctrl–R0)
Rsample是添加测试化合物的OD570/OD605吸光度比值;
Rctrl是未加测试化合物(只加了测试化合物溶剂的孔)组的OD570/OD605吸光度比值;
R0是无细胞组的OD570/OD605吸光度比率的平均值。
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