产品属于:
产品名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 |
猪外周血NK细胞分离液 |
Pig peripheral blood NK cells separation solution |
2×200mL |
EY-01X8811 |
检验方法:
全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
方法一(需留取血浆备用)
首先取抗凝血250g离心10min,弃血浆,补加胎牛血清(添加量与弃去血浆量等同)制成细胞悬液,根据细胞悬液液体体积,选择适当离心管进行试验。
取一支离心管,依次小心加入分离液1、分离液2(体积比为3:1,试剂总量与细胞悬液体积比为2:1。如细胞悬液为2mL,则先后加入3mL分离液1、1mL分离液2。试剂总量最少不低于4mL。),制成梯度界面,各液面分层一定要清晰。
用吸管小心吸取细胞悬液加于分离液液面上,400~500g,离心20~30min。
注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到******分离效果。
离心后,此时离心管中由上至下分为六层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色NK细胞层(第一层白环及上层50%分离液2)。第三层为环状乳白色单个核细胞层(下层50%分离液2及第二层白环)。第四层为透明分离液1液层。第五层为粒细胞层。第六层为红细胞层。
用吸管小心吸取第二层到另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL清洗液,混匀细胞。
250g,离心10min。
弃上清。
用吸管以5mL清洗液重悬所得细胞。
250g,离心10min。
重复6、7、8,弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
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