产品属于:
DAPI的中文名称是4,6-联脒-2-苯基吲哚,是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。其作用机理与溴化乙锭(EB)等染色剂的机理类似:它们与DNA双螺旋的凹槽部分可以发生相互作用,从而与DNA的双链紧密结合。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm,正好UV(紫外光)的激发波长是356nm,使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。用于细胞核染色时,推荐的DAPI工作浓度为0.5~10μg/mL。
产品名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 |
DAPI粉末 |
DAPI dihydrochloride |
10mg |
EY-01X9339 |
基本信息:
CAS号:28718-90-3
分子式:C16H15N5·2HCl
分子量:350.25
外观:黄色结晶性粉末
溶解性:溶于水(20mg/mL)
密度:1.4100
含量:>95%
激发波长(Ex):340nm(DAPI),358nm(DAPI-DNA)
发射波长(Em):488nm(DAPI),461nm(DAPI-DNA)
使用方法:
以下方法仅供参考。
配制母液:
用双蒸水溶解,终浓度为1mg/ml。本产品不可以用缓冲液直接溶解。-20℃可保存1年,建议分装保存,避免反复冻融。
配制工作液:
用双蒸水或PBS稀释母液,配制成所需要的工作的浓度(0.5~10μg/ml)。
固定的细胞或组织染色:
对于固定的细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色,则直接进行DAPI染色。
对于贴壁细胞或组织切片:加入适量DAPI染色液,覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞:至少加入待测染色样品体积3倍的染色液,混匀。室温放置3~5分钟。
吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2~3次,每次3~5分钟。
直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长358nm,发射波长461nm。
活细胞或组织染色:
细胞培养物中加入适量DAPI染色液,约1/10细胞培养基体积,必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1mL染色液,对于96孔板一个孔需加入100μL染色液。
在37℃培养细胞10~20分钟。
用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长358nm,发射波长461nm。
注意事项:
荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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