介绍培养基和灭菌的操作以及步骤

 1.调理 pH 值

   用pH试纸(或 pH 电位计、氢离子浓度比色计)测验培育基的pH值,如不契合需求,可用10%HCl或10%进行调理, 直到调理到配方要求的pH值停止。

 2.分装

   已过滤的培育基应进行分装。 如果要制造斜面培育基, 须将培育基分装于试管中。如果要制造平板培育基或液体、半固体培育基, 则须将培育基分装于锥形瓶内。

 3.过滤

   用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培育基过滤。用纱布过滤时, zui好折叠成六层, 用滤纸过滤时, 可将滤纸折叠成瓦棱形, 铺在漏斗上过滤。

 4.制造溶液

   向容器内参加所需水量的一部分, 按照培育基的配方, 称取各种质料, 顺次参加使其溶解, zui终补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质, 需加热溶解, 加热进程所蒸腾的水分, 应在悉数质料溶解后加水补足。

制造固体培育基时, 先将上述已配好的液体培育基煮沸, 再将称好的琼脂参加, 持续加热至彻底消融. 并不断搅拌, 防止琼脂糊底烧焦。

 分装时, 一手捏松绷簧夹, 使培育基流出, 另一只手抓住几支试管或锥形瓶, 顺次接取培育基。分装时, 注意不要使培育基粘附管口或瓶口, 防止浸湿棉塞引起杂菌污染。

装入试管的培育基量, 视试管和锥形瓶的巨细及需求而定. 一般制造斜面培育基时, 每只 15×150 毫米的试管, 约装 3～4 毫升 (1/4～1/3 试管高度), 如制造深层培育基, 每只 20×220 毫米的试管约装 12～15 毫升。每只锥形瓶装入的培育基, 一般以其容积的一半为宜。

 5.制造斜面培育基和平板培育基

培育基灭菌后, 如制造斜面培育基和平板培育基, 须趁培育基未凝结时进行。

(1)制造斜面培育基。在试验台上放 1 支长 0.5～1 米左右的木条, 厚度为 1 厘米左右，将试管头部枕在木条上, 使管内培育基天然歪斜, 凝结后即成斜面培育基。

(2)制造平板培育基。将刚刚灭过菌的盛有培育基的锥形瓶和培育皿放在试验台上, 点燃酒精灯, 右手托起锥形瓶瓶底, 左手拔下棉塞, 将瓶口在酒精灯上稍加灼烧, 左手翻开培育皿盖, 右手敏捷将培育基倒入培育皿中, 每皿约倒入 10 毫升, 以铺满皿底为度. 铺放培育基后放置 15 分钟左右, 待培育基凝结后, 再 5 个培育皿一叠, 倒置过来, 平放在恒温箱里,24 小时后查看, 如培育基末长杂菌，即可用来培育微生物。

 6.加棉塞

   分装结束后, 需求用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的首要意图是过滤空气, 防止污染. 棉塞应选用普通新鲜、干燥的棉花制造, 不要用脱脂棉, 防止因脱脂棉吸水使棉塞无法运用。制造棉塞时, 要根据棉塞巨细将棉花铺展成恰当厚度, 揪取手掌心巨细一块, 铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中, 用右手食指插入棉花中部, 一起左手食指与姆指稍稍紧握, 就会形成 1 个长棒形的棉塞. 棉塞作成后, 应敏捷塞入管口或瓶口中, 棉塞应紧贴内壁不留缝隙, 以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松, 塞好后, 以手提棉塞、管、瓶不下落为适宜。棉塞的 2/3 应在管内或瓶内, 上端露出少量棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札, 准备灭菌。