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人膀胱癌顺铂耐药株BIU-87/DDP细胞处理方法

人膀胱癌顺铂耐药株BIU-87/DDP细胞处理方法:

一、贴壁细胞

1、 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。

4、37度平衡1-2小时。

5、用移液管吸取培养基,到50ml离心管中,剩下细胞密度达到80%至90%可以传代,如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。

6、如果肉眼检查上清有细胞,对50ml上清进行离心收集细胞,如果细胞连片状态,弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化(1ml胰酶37度),接种培养。


二、悬浮细胞

1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。

4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。

5、1000rpm,5min 离心,用吸管小心吸出上清,加入培养基,重悬细胞。

6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种,加入新鲜培养基,置于 37℃,5%CO2 培养(大部分细胞)。


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