细胞凋亡DNA断裂片段提取试剂盒接种细胞

1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。

2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。

3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。

4．将细胞稀释到2.5×103个/mL～5×10个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10个/mL。

5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。

6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。

 注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。

7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11列反应的影响。

8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。