利用异源探针可以鉴定相关的基因
利用异源探针可以鉴定相关的基因
不同生物控制同一蛋白的基因,有许多相同的序列,显示了进化中的保守性。利用相关基因的保守序列可以将不同生物中的基因克隆出来。例如酵母中细胞色素C探针可以将其他生物中的细胞色素C基因鉴定出来。当然实验条件需要调整,主要是降低退火的温度。
异源探针还可以鉴定同一生物中相关的基因。
利用抗体筛选cDNA表达文库
除了杂交探针外,还可以选择免疫学筛选。杂交探针直接鉴定克隆的DNA片段,而免疫学方法鉴定的是克隆基因所表达的蛋白质。
a) 抗体
如果蛋白质样品注射进兔子体内,动物的免疫系统就会合成抗体结合、降解外来分子。在自然过程中,动物利用这种防御机制对付细菌、病毒和其他药品的入侵。
当一种蛋白进入兔子体内,其血液中的抗体在随后的几天时间内保持较高的浓度,可以获得大量的纯化的抗体。
b) 利用纯化的抗体检测重组克隆中的蛋白
重组克隆转到聚乙xi膜上,裂解细胞,添加含有抗体的溶液,抗体本身是经过标记的,聚乙xi膜也要经过含有标记过的蛋白A溶液的冲洗,这样细菌的蛋白就会特异的结合到利用抗体制备的免疫球蛋白上。可以用放射性标记也可以利用产生荧光或化学光的非放射性标记。
c) 基因表达的问题
免疫检测依赖于克隆基因的表达,然而一种生物的基因在不同的生物中可能不表达。特别是动物或植物(叶绿体除外)的基因在大肠杆菌中表达的可能性极小。
可以利用特殊的载体,称为表达载体来解决这一问题,表达载体是为在细菌细胞中启动克隆的基因表达而设计的。将动物基因克隆到表达载体,然后重组到E. coli中进行免疫筛选是非常有效的,已经获得了多个重要的激素基因。
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