人血凝素(HA)ELISA试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

615小鼠乳腺癌瘤株；Ca759

615小鼠乳腺癌瘤株；Ca761

615小鼠乳腺癌瘤株；Ca763

615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7712

615小鼠T细胞性白血病瘤株；L7912

615小鼠肺癌瘤株；HP615

615小鼠滑膜肉瘤瘤株；ZM755

615小鼠乳头状肺腺癌瘤株；P615

小鼠肝癌瘤株；H22

615小鼠前胃癌瘤株；Fc

KM小鼠子宫颈癌瘤株；U14

KM小鼠子宫颈癌瘤株；U27

KM小鼠网织细胞肉瘤瘤株；LⅡ

KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株；G422

615小鼠网织细胞性白血病瘤株；L615

艾氏腹水瘤瘤株；Ehrlich

T739小鼠肺腺癌瘤株；LA795

小鼠肉瘤瘤株；S180

C57小鼠黑色素瘤瘤株；ME （Me）

615小鼠树突状细胞肉瘤瘤株；DCS

KM小鼠未分化神经胶质瘤瘤株；B22

小鼠黑色素瘤瘤株；B16

小鼠Lewis肺癌瘤株；LLT

BALB/C小鼠肝瘤株；BNL 1ME A.7R.1

小鼠黑色素瘤细胞；B16-F1

小鼠T淋巴瘤细胞（鸡OVA基因修饰）；E.G7-OVA

小鼠骨髓瘤细胞；P3/NSI/1-Ag4-1

小鼠B细胞杂交瘤细胞；W6/32

杂交瘤（B类）；Z51B3C10H12A12G2F7B5

杂交瘤（B类）；Z51B3C10H12A12G2F7E7