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商品属性：
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产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
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EPI400电转感受态细胞 |
5×50 μl/20×50 μl/10 μl |
-80℃（6个月） |
EY-01G98574 |
EPI400电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。该菌株来源于EC100菌株，将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因，即是EPI400菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆，在加入WDEPI-诱导剂I后又可以提高质粒产量到正常状态。[mcrA, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。BFB生命科学的EPI400电转感受态细胞适用于不稳定DNA或毒性基因的克隆，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1010 cfu/μg DNA。
操作方法：
0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
取-80℃保存的EPI400电转感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
对于连接产物，大部分公司的T4连接酶反应体系或50度反应重组体系可与EPI300电转感受态混合后电击转化，无需进行DNA纯化，但DNA浓度不能过高，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。
对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，然后与EPI300电转感受态混合进行电击转化。
用200 μl枪头（用刀切除0.5cm枪尖）将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温），用1 ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml锥形离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。
注意事项：
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