商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
Y187感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl/5 ml |
-80℃(3个月) |
EY-01G98580 |
Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株 (Y2HGold,AH109等)通过mating操作进行筛库试验。Transformation marker为: trp1, leu2,报告基因为:lacZ,MEL1。Y187-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD (来自酵母转录因子GAL4N端1~174位氨基酸)与目标蛋白 (Bait)的融合蛋白;质粒pGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD (GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域 (AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD不与AD结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合,形成 bait融合蛋白 (bait –BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD),如果bait和prey发生相互作用,就会促使BD和 AD的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。Y187有两个报告基因:lacZ,MEL1,分别由两种不同的启动子 (G1,M1)启动,这两种启动子只有GAL4识别的17 bp核心区相同,其余部分均不同,大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。BFB生命科学的Y187感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法:
取100 µl冰上融化的Y187感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴,重复一次)10 µl,PEG/LiAc 500µl并吸打几次混匀,30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl重悬,离心30s弃上清。
ddH2O 50 µl重悬,涂平板,29℃培养48-96 h。
注意事项:
地址:上海一研生物科技有限公司
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