商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
EGY48感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl/5 ml |
-80℃(3个月) |
EY-01G98581 |
EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA系统酵母双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;Transformation marker为:his3,trp1,ura3,报告基因为:LEU2;报告基因UAS (上游激活序列)来源于LexA op(x6),只有当Bait和Prey互作时才能启动 LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3,用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白 (Bait)的融合蛋白;质粒pB42AD的筛选标志为TRP1,用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白;报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3,报告基因为LacZ,报告基因UAS来源于LexA op(x6),只有当Bait和Prey互作时才能启动 LacZ表达。BFB生命科学的EGY48感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGBKT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法:
取100 μl冰上融化的EGY48感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5ug,Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/LiAc 500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
5000 rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400 µl重悬,离心30 s弃上清。
ddH2O 50 µl重悬,涂平板,29℃培养48-96 h。
注意事项:
地址:上海一研生物科技有限公司
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