商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
Y190感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl/5 ml |
-80℃(3个月) |
EY-01G98585 |
Y190菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为: trp1,leu2,cyh2;报告基因为: lacZ,HIS3,MEL1。Y190-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:(pGB和pACT2)或(pGBKT7和pGADT7)。质粒pGB由pGBKT7改造而来,筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒pACT2与pGADT7的结构和功能类似,筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD不与AD结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合,形成bait融合蛋白(bait–BD)和prey融合蛋白(prey-AD),如果 bait和prey发生相互作用,就会促使BD和AD的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。BFB生命科学的Y190感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法:
Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。
取100 µl冰上融化的Y190感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg,Carrier DNA10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
5000 rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400 µl重悬,离心30 s弃上清。
ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
注意事项:
地址:上海一研生物科技有限公司
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