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表达感受态细胞

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YM4271感受态细胞

商品属性:

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规格

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货号

YM4271感受态细胞

10×100 μl/50×100 μl/10 μl/5 ml

-80℃(3个月)

EY-01G98587


商品详细说明:


YM4271菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株EGY48Y187等通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为:trp1leu2ura,报告基因为: HIS3。可用于酵母双杂,酵母单杂或异源蛋白表达等试验。BFB生命科学的YM4271感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA

操作方法:


100 µl冰上融化的YM4271感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µgCarrier DNA (95-100℃5 min,快速冰浴,重复一次) 10 µlPEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)

将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)

5000 rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400 µl重悬,离心30 s弃上清。

ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h

注意事项:


感受态细胞最好在冰上融化。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
YM4271酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。

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