商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃(6个月) |
EY-01G98593 |
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,从而减少对重组蛋白的降解,补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子 (AGA, AUA, CCC, CUA)对应的tRNA (argU, ileY, proL, leuW),提高外源基因,尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列、pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达,同时具有四环素,氯霉素,链霉素,壮观霉素抗性。BFB生命科学的BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/µg DNA。
操作方法:
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含抗生素的2YT或LB培养基上。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项:
感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
混入质粒时应轻柔操作。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
为获得需要量的蛋白,******诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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