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Rosetta-Gami B(DE3)感受态细胞

商品属性：

产品名称	规格	保存条件	货号
Rosetta-Gami B(DE3)感受态细胞	10×100 μl/50×100 μl/10 μl	-80℃（6个月）	EY-01G98596

商品详细说明：

Rosetta-gami B(DE3)菌株聚合了BL21，Tuner，Origami和Rosetta四种菌株的优点：lacY1基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变赋予其Tuner菌株的优点——IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。

pRARE赋予其Rosetta菌株的优点——补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。

gor522::Tn10 trxB赋予其Origami菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。

该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。

BFB生命科学的Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，四环素抗性，由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/μg DNA。

操作方法：

Rosetta-gamiB(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。

将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

混入质粒时应轻柔操作。

转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。