商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
Rosetta 2(DE3)感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃(6个月) |
EY-01G98598 |
Rosetta 2(DE3)菌株来源于BL21,是BL21的衍生菌株,为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21 (DE3)细胞中即是Rosetta 2(DE3),pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。BFB生命科学的Rosetta 2(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。
操作方法:
Rosetta 2(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液,37℃,200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项:
感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
为获得需要量的蛋白,******诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
Rosetta 2(DE3)菌株携带 pRARE2质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。
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