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商品属性：
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产品名称 |
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OrigamiB(DE3)PLysS感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃（6个月） |
EY-01G98600 |
Origami B (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶（T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达），适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (glutathione reductase) (gor)，这两个酶是还原途径的关键酶，突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。此外，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素抗性质粒的表达。BFB生命科学的Origami B (DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。
操作方法：
Origami B (DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
混入质粒时应轻柔操作。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。
为获得需要量的蛋白，******诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
具有氯霉素，卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素和四环素抗性质粒的表达。
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