商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
Tuner(DE3)PLysS感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃(6个月) |
EY-01G98605 |
Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株,此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞,产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3) pLysS,pLysS表达T7溶菌酶,T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。BFB生命科学的Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
操作方法:
Tuner(DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液,37℃,200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项:
感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
混入质粒时应轻柔操作。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
为获得需要量的蛋白,******诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
Tuner(DE3) pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。
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