商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
ER2566感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃(6个月) |
EY-01G98606 |
ER2566菌株是NEB公司开发的具有超高转化效率的蛋白表达原核菌株,来源于BL21。Lac启动子启动下游T7RNA聚合酶的表达,可用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性。同时ER2566为lon 和ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能够有效抑制表达的异源蛋白在大肠杆菌体内的降解,Δ(mcrC-mrr)114,mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制,提高了外源甲基化DNA的转化效率。ER2566感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达109 cfu/μg DNA。
操作方法:
ER2566感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项:
感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
混入质粒时应轻柔操作。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
为获得需要量的蛋白,******诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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