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商品属性：
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产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
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M15(PREP4)感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃（6个月） |
EY-01G98609 |
M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒，该质粒通过p15A复制子启动复制，可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中；同时该质粒携带lac I基因，可高效表达lac抑制蛋白，在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达，特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株，特别适合PQE系列质粒或由E.coli T5启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株卡那霉素抗性。BFB生命科学的M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达2×108 cfu/μg DNA。
操作方法：
M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养，M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。
注意事项：
感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
为获得需要量的蛋白，******诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
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