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商品属性：
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产品名称 |
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ArcticExpress (DE3) PRARE2感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃（6个月） |
EY-01G98612 |
ArcticExpress (DE3) pRARE2来源于ArcticExpress (DE3)，将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四环素，庆大霉素，氯霉素抗性，endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性，在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。同时，pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。BFB生命科学的ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。
操作方法：
ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（（平板中务必同时含有34 ug/ml的氯霉素，40 ug/ml的庆大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素；若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株携带 pRARE2质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素、40ug/ml的庆大霉素，以防质粒丢失。
为获得需要量的蛋白，******诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性，不可用于具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性质粒的转化。
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