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商品属性：
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产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
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SHuffle T7 E. Coli感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/10 μl |
-80℃（6个月） |
EY-01G98613 |
SHuffle T7 E. coli菌株是K12的衍生菌株。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶 DsbC基因，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外DsbC还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象，同时该菌株可降低目的基因的本底表达，适合于毒性基因的原核表达。SHuffle T7 E. coli菌株染色体中整合了一个拷贝的T7 RNA聚合酶基因，可以表达噬菌体T7 RNA聚合酶，适合于T7启动子诱导的蛋白表达；该菌株还可以表达大肠杆菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 E. coli菌株具有抗T1噬菌体感染的特点，具有链霉素，壮观霉素抗性。BFB生命科学的SHuffle T7 E. coli感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。
操作方法：
SHuffle T7 E. coli感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200 rpm复苏60分钟。
5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10 mM均可）。
为获得需要量的蛋白，******诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
SHuffle T7 E. coli 菌株具有链霉素，壮观霉素抗性，不可用于具有链霉素，壮观霉素抗性质粒的转化。
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