商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
GV3101 (PJIC SA_Rep)感受态细胞 |
10×100 μl/50×100 μl/100×100 μl/10 μl |
-80℃(12个月) |
EY-01G98617 |
GV3101(pJIC SA_Rep)菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性;在GV3101菌株中转入help质粒:pJIC SA_Rep即为GV3101(pJIC SA_Rep)菌株,可帮助pgR106,pgR107,pGreen,pGs2系列质粒在农杆菌中复制,同时赋予该菌株四环素(tet)抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。BFB生命科学的GV3101(pJIC SA_Rep)感受态细胞经特殊工艺制作,pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>1×103 cfu/μg DNA。
操作方法:
取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素(不含四环素抗性)的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h)。
注意事项:
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