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Rho123可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有任何毒性。Rho123的******激发波长为507nm，******发射波长为529nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。

储存条件：Rho123 -20℃避光保存，避免反复冻融。孵育缓冲液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头●离心机 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 始终保持平衡染液中pH 值的一致性，因为pH 值的变化将影响膜电位。
● 根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。
●线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。但是结果分析时注意排除荧光淬灭现象，Rho123荧光物质的激发光谱和发射光谱有一部分是重合的，其发射光有一部分(与激发光重合的部分)会被自己重新吸收，而且这种吸收的效益随着该荧光物质的浓度增加而增强。换而言之，当荧光物质浓度很高的时候其荧光强度和浓度的增加不成正比，此时注意检测结果的分析。采用JC-1 法可以减少荧光淬灭的影响。
悬浮细胞：
1．1×染色缓冲液和Rho123染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制1×染色缓冲液和Rho123染色工作液。取100μl 10×染色缓冲液加900μl纯水稀释，混匀并预热至37℃，即成1×染色缓冲液；在500μl 1×缓冲液中加入10μl Rho123，混匀配成Rho123染色工作液；
2．收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。
3．用PBS 洗涤细胞两次。离心收集细胞。
4．用500μl Rho123染色工作液将细胞重悬，细胞密度约5-10×105个/ml。37℃，5% CO2的培养箱中孵育15分钟。
5．常温离心收集细胞。用PBS洗涤细胞2次。
6．用500μl预热的1×染色缓冲液将细胞重悬。
7．用流式细胞仪或荧光分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
贴壁细胞：
对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
纯化线粒体：
1．把配制好的RHO123染色工作液再用RHO123 孵育缓冲液(1×)稀释5倍。
2．0.9mL 5倍稀释的RHO123染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100ug的纯化的线粒体。
3．结果检测。
组织样本：
组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。

结果分析：
检测时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm。
线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。
用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的情况。
也可以用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察；用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测。