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Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1 也称interkeukin 1b conberting enzyme(ICE)，有时被写作caspase-1或caspase 1，是caspase 家族中唯一可以剪切IL-1b前体蛋白或IL-18 前体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase11可以剪切45kD的caspase 1前体蛋白，产生20kD和10kD的片断，这两个片断可以形成异源二聚体(heterodimer)，并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。Caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL 来调节细胞凋亡，并通过其对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。
本Caspase 1活性检测试剂盒是基于caspase1可以催化Caspase1 底物产生黄色的pNA，pNA在405nm附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-1检测。

储存条件：裂解缓冲液和检测液2-8℃保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
● 须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405。
● 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
● 样品适合采用Bradford 法进行蛋白浓度测定。
● 如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度大于2mg/ml。
● 如果样品中激活的caspase 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。
● Caspase-1底物避光保存，使用过程中尽量避光。
● Caspase-1底物溶液冻存后可能产生沉淀，使用前请混匀。

使用方法：
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。
二、样品处理
A、细胞样品
1．收集2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．在细胞中加入100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4．置冰上15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5．在4℃，500×g条件下离心5分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
B、组织样品
1．取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1．在4℃，500×g条件下离心5分钟。
2．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。
四、Caspase 1活性检测
1．取10μl 大约含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl检测缓冲液。
2．再加入10μl caspase-1 底物(使用前请混匀)，在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-1水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
3．测定A405nm或A400nm。
4．根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 1活性程度。
常见问题分析：
比色法caspase-1活性检测方法常见的问题主要为测得的OD值偏低，颜色变化不明显，无法显示与对照组细胞的差异，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1．样品上样量不够：本方法检测需要的细胞数量须在3×106以上，或者新鲜组织50mg以上，每次反应的蛋白量需要在100μg以上。如果量不够，请增加细胞或组织的量。
2．样本不新鲜：使用新鲜的细胞或组织样本。
3．样品裂解不够充分：细胞或组织需要进行充分裂解，最好可以加入适当的蛋白酶抑制剂混合物裂解，裂解后应无明显大量的沉淀，以保证有效获得蛋白。
4．样品中激活的caspase-1 水平偏低：首先确认模型的凋亡现象是否明显，以及根据文献和其他验证方法确认该凋亡是否激活caspase-1。
5．检测时间点的选择是否合适：不论哪种通路的凋亡，需要在caspase-1被有效激活并达到相应活化程度后的一定时间范围内检测，过早或过晚均不合适。
6．不适合本方法检测：某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能是非依赖于caspase-1活化的机制，此种情况时利用本试剂盒检测caspase-1 无明显变化，需要考虑凋亡机制的其他通路。