产品属于：

细胞衰老试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测。本试剂盒以X-Gal 为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。

储存条件：试剂ABC 2-8℃保存；试剂D -20℃避光保存。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 96孔培养板 ● CO2培养箱 ● 显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
●试剂A有腐蚀性，操作时要小心。
●试剂D刚溶解时可能会有沉淀，充分混匀或者漩涡震荡使沉淀全部溶解，之后用于染色实验
●试剂D需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。
●染色后的细胞样品可以在 4℃冰箱保存，需避免光照。
● 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育最长至24 h。细胞染色孵育时间应根据不同细胞样本情况经预实验后选定为 3-24h。
● 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH 值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH 值，导致染色失败。
● 避免使用细胞状态极差的细胞或过度传代的细胞，可能导致假阳性。

1．染色工作液配制
实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温15-20分钟。按以下染色工作液配方，根据实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入37℃恒温水槽里预热，即为染色工作液。

1．1 将染色剂C2 粉剂用染色液C1 充分溶解混匀。配成染色液C。
【注】
低温时试剂C 结晶不溶解，可以37℃水浴。

1．2 将300μl染色液C 加入10ml染色液B中，充分混匀。配成染色工作液。
【注】
配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。
不同体系染色工作液用量：本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下面建议用量调整染色工作液用量：35 mm培养皿：1ml；96孔培养板：0.1ml；48孔培养板： 0.2ml；24孔培养板：0.25ml；12孔培养板：0.5ml；6孔培养板：1.0ml；25cm2培养瓶3.0ml
以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于对于96孔板，可以做1000个样本的检测。对于组织切片足够做1000个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。
2．细胞染色
2.1 贴壁细胞：(96孔板为例)
1)吸除细胞培养液，用0.1ml洗涤液E 洗涤1次，加入0.1ml固定液A，覆盖整个生长表面。室温固定5分钟。
【注】
①对于其他类型的培养板，固定液用量参照此比例进行操作。
2)吸除固定液A，用PBS 洗涤细胞3次，每次3分钟。
【注】
①在振荡器/脱色摇床上于室温轻轻摇动3分钟。
3)吸除PBS，每孔加入0.1ml 预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。
4)37℃孵育4小时～24小时，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住细胞培养板防止液体蒸发。
【注】
① 不同样本需要的染色时间不同，根据预实验情况确定具体样本的染色时间。在前12小时每隔4小时观察细胞，12小时后隔12小时观察即可。也可直接12小时过夜孵育。
② 37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2 会影响染色工作液的pH 值，导致染色失败。
5)普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝绿色。
【注】
① 如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
2.2 悬浮细胞染色：
1)离心收集细胞至1.5ml离心管内，用0.1ml 洗涤液E 洗涤1次，加入0.1ml固定液A，覆盖整个生长表面。室温固定15分钟。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。
2)离心，吸除细胞固定液，用PBS 洗涤细胞3次，每次3分钟。
3)离心，吸除清洗液A，每管加入0.1ml预热的染色工作液。
4)37℃孵育3小时～15小时，或直到细胞呈现蓝色(注：避免液体蒸发)。
【注】
① 37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH 值，导致染色失败。
5)取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。
【注】
① 如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入PBS缓冲液，4℃可以保存数天。
也可取细胞用于涂片，加封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
2.3组织切片染色：
1)对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；
2)加入适当体积的固定液A，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15分钟。
3)用洗涤液E 浸泡洗涤组织1次，用PBS 洗涤2次，每次不少于5分钟；
4)吸除PBS，加入适当量的预热的染色工作液。
5)37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，也可以把整个切片浸泡在染色工作液中。
【注】
① 37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
6)普通光学显微镜下观察和计数。
【注】
① 如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加封片剂封片后，4℃可保存较长时间。