产品属于：

C01细胞活性探针是一种性合成的绿色荧光探针，其本身荧光极低，进入活性细胞并被活细胞的酯酶剪切生成强绿色荧光的产物。绿色荧光产物的的激发和发射波长分别为488nm和520nm。C01细胞活性探针的细胞毒性很低，不会抑制任何的细胞功能如增殖。使用C01细胞活性探针的活性检测的实验结果与标准的51Cr-释放法所得结果相一致。

储存条件：C01探针-20℃防潮避光保存；
探针稀释液2-8℃保存。
探针稀释液长期不用可以-20℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便：仅使用单一试剂；
●快速；
● 灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
● 结果稳定：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠；
● 无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；
● 适合于高通量药物筛选。
检测方法：
荧光酶标仪
流式细胞仪
荧光显微镜
激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞
● 贴壁细胞
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●荧光酶标仪或流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦
● CO2培养箱 ●离心机 ● 移液器 ●冰箱 ●冰盒
耗材
●离心管 ● 吸头
试剂
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：
约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
HBSS(Hank's Balanced Salt Solution； With：Calcium Magnesium Glucose； Without：Phenol Red。Components：CaCl2(anhydrous)140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/L (5.333mM)、KH2PO4 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM))

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● C01细胞活性探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘
附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● C01细胞活性探针对湿度非常敏感，若是C01细胞活性探针溶液
每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
● 由于C01细胞活性探针的稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
● C01细胞活性探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
● 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。
● 建议使用黑壁96孔板。
● 不同细胞染色浓度和时间不同，建议做预实验摸索******染色浓度和时间，采用最低染色浓度。
细胞样本处理
仅供参考，以实际为准！
1．收集细胞，加细胞悬液100μl(约5000-10000个细胞)到96孔板(边缘孔用无菌水或PBS 填充)。每板设对照(加100μl培养基)。
2．置37℃，5% CO2 孵育过夜，倒置显微镜下观察。
3．每孔加入10μl待检测药物溶液，37℃孵育。
4．到待测时间点进行细胞活性检测。
活性检测
1．染色工作液的配制：
从冰箱中取出荧光染色试剂，室温溶解后混匀。
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B 将C01荧光染料10倍稀释。
再用相应的其他缓冲液(如HBSS)或无血清培养基将探针C01进行50-100倍稀释，配制成染色工作液。
【注】:
● 也可以不使用本试剂盒中的试剂B，直接用相应的HBSS等缓冲液或无血清培养基稀释C01染料至所需浓度。
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的******工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度400-2000倍稀释，500-1000倍适合大多数细胞样本。
● 梯度筛选的原则为使用最低的探针浓度得到最好的荧光结果。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。
2．离心细胞，弃培养基，用PBS 洗涤细胞2-3次，离心，弃PBS。
【注】:
● 由于培养基中的血清等可能含有酯酶，导致C01细胞活性探针分解，会导致空白上升，所以需要用PBS 洗涤数次直到完全洗净。
3．每孔加入100μl染色工作液，37℃避光孵育15-30分钟。
【注】:
● 此操作步骤以96孔板贴壁细胞原位染色检测为例。其他培养器皿操作类似。将染色工作液覆盖细胞即可。
● 也可将细胞消化或离心(悬浮细胞)收集后在离心管中洗涤和染色。
4．用PBS 洗涤细胞2次。
5．加入100μl HBSS或无血清培养基。
6．用荧光酶标仪/显微镜/流式细胞仪检测结果。******激发波长488nm，******发射波长分别为520nm。