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细胞凋亡与增殖

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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

产品属于:

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核裂解,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显著降低,对90°角光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向角和90°角光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡细胞。用 PI对细胞进行染色,凋亡细胞由于总DNA量降低,于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群,即G1峰前出现亚二倍体峰(sub-G1),细胞凋亡群。

产品名称 英文名称 产品规格 产品货号
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
50T|100T
EY-01X8759

储存条件:-20℃避光保存。
有效期:一年。

注意事项: 
1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞,并缓慢滴加75%乙醇,直接加入会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇,终浓度为70-75%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
3.为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差,可以在实验前进行细胞的同步化处理,减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期,不能是完全长满,一般在50~80%比较好。
4.分析的时候需要的是单个的细胞,400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉,否则会出现人为的多倍体干扰,不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤,请在染色之前将细胞弹的很散,再进行染色。
5.组织处理方法:用剪刀将组织剪成小块,用0.25%胰酶消化30min-1h,200-400目筛网过滤细胞,获得单细胞悬液。如组织难以消化,可加入适量胶原酶。

试剂盒以外自备试剂和仪器:
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪 

使用方法: 
使用注意事项: 
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 最好使用含EDTA的细胞消化液。
● 洗涤细胞离心转速不可超过1000rpm/min。

1.收集样本细胞,细胞数量在10×105个以内。
2.用冷PBS洗涤细胞两次。
3.75%冰冻乙醇-20℃固定1小时或4℃固定过夜。
4.用冷PBS洗涤细胞一次。
5.用200-500μl冷PBS重悬细胞。
6.加入Rnase A溶液20μl 37℃水浴30分钟。
7.400目筛网过滤。
8.加入400μl PI染液,轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。
9.流式检测结果。******激发波长为488nm。

特别提醒:

1. 
本产品仅可用于科研实验,严禁用于其他非科研用途!
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

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