产品属于：

产品特点：
1．即开即用，用户不需要单独准备各种溶液。
2．操作简捷，性能稳定，显色清晰。
3．可用于组织切片中的钙沉积，尤其适用于骨细胞或组织的病理和生理研究。
4．可用于检测动物原生代或培养细胞的钙沉积。
5．本产品为通用型，不但用于钙离子的检测，还可用于FeCl2和CdCl2的检测。

试剂盒组成：
成分 规格
茜素红S染色 100ml
茜素红S pH调节液 10ml
说明书 1份


储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：试剂具有腐蚀性，操作时须带手套。实验时可以用含金属离子的切片或培养细胞作为阳性对照。可溶性蛋白会干扰茜素红S与钙的相互作用，所以样品必须经过固定处理(以去除细胞中的可溶性蛋白)。对培养细胞，还必须洗涤去掉培养基(含血清等蛋白成分)。茜素红S与钙的螯合反应需要在水相发生，因此加入茜素红S 前最好用水溶液洗涤掉前面操作所残留的有机溶剂。

一、茜素红S染色液的准备
1、根据所需检查的金属离子按下表选择茜素红S染色液的******pH。
金属离子 ******PH 呈现的颜色
CaCl2，CaPO4、CaCO3 4.28-6.75 橙红
FeCl2 5.62-8.05 深紫
CdCl2 5.11-5.78 品红

2．用茜素红S pH调节液将茜素红S染色液调到所需的pH值。

二、染色载片上细胞
3．用缓冲中性福尔马林、福尔马林-乙醇混合液或乙醇作为固定剂固定铺在载玻片上的细胞(本试剂盒不提供上述固定剂)。
4．将细胞放入95%乙醇中处理。
5．将载玻片在空气中干燥。
6．将载玻片放在装有茜素红S染色液的染色缸中染色1-5分钟。注意：此步需要密切控制，最好每隔一分钟放在显微镜下检测，******时间随样品中盐离子的多少不同而不同。
7．用蒸馏水洗涤载片一次。
8．用丙酮浸泡载波片30秒。
9．用丙酮-二甲苯混合液(50：50)浸泡浸泡载波片15秒。
10．肉眼可见红色或紫色(取决于所检查的离子)即可终止染色，放光学显微镜观察。钙沉积阳性细胞将呈现桔红色。

三、染色石蜡包埋切片
11．按常规方法进行固定、包埋、切片、脱蜡和水化等操作，直到70%乙醇处理这步。注意：固定剂最好使用4%的副甲醛或10%福尔马林，切片厚度最好在0.4μm。
12．将切片浸入蒸馏水中。
13．将切片浸泡在茜素红S染色液中30秒-5分钟，具体时间以肉眼或显微镜下可见桔红色斑点为准。
14．用滤纸吸尽染色液后浸入丙酮20次。
15．再进入丙酮-二甲苯混合液(50：50)20次。
16．最后用二甲苯处理并用封固剂封片。

四：染色细胞培养(最好是26或6孔培养板培养的细胞，便于在显微镜下观察)
17．小心抽去培养液，注意不要吸走细胞。
18．沿壁上缓慢加入1-2mL自备的1×PBS或HBSS缓冲液，然后再小心将加入的液体吸出。
19．每孔中加入自备的无水乙醇直到全部覆盖细胞，室温放置30分钟后小心移弃无水乙醇，室温晾干。此步用于固定细胞。也可用10%甲醛代替无水乙醇，但固定时间只需要15分钟，同时还需要用蒸馏水洗涤3次才能进入下一步。每次洗涤时，先加入蒸馏水，再浸泡5-10分钟，然后小心吸走蒸馏水。注意：操作时不要破坏细胞单层。
20．每个细胞培养孔中加入1mL 茜素红S染色液，在室温下孵育至少20分钟，最后小心吸走茜素红S染色液。
21．加入1mL蒸馏水，然后小心吸走蒸馏水。此为洗涤步骤。注意：洗涤一定不要震荡以避免形成的钙沉积物脱落。
22．重复上步操作3次(共洗涤4次)。
23.样品可立即用于显微镜检测。有钙沉积的细胞将呈现桔红色。