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大鼠elisa试剂盒

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大鼠生长激素释放多肽(GHRP)elisa试剂盒

大鼠生长激素释放多肽(GHRP)elisa试剂盒用途

本试剂盒仅供科研使用,定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中大鼠生长激素释放多肽(GHRP)的含量。

原理:

采用竞争法测定大鼠生长激素释放多肽(GHRP)水平。用大鼠生长激素释放多肽(GHRP)抗原包被微孔板,制成固相载体,实验

时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入 HRP 标记的GHRP抗体,标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与

固相抗原结合。反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。

标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的GHRP含量呈负相关。采用酶标仪在

450nm 波长测定吸光度(OD 值),根据标准曲线,计算测试样品中GHRP浓度。

大鼠生长激素释放多肽(GHRP)elisa试剂盒试剂盒组成:

大鼠生长激素释放多肽(GHRP)elisa试剂盒技术流程:


样品收集、处理及保存

1. 细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。

2. 细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或

者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。

3. 血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。

4. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上

清。

5. 体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。

6. 组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000

rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。

7. 样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

8. 保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标

本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


大鼠生长激素释放多肽(GHRP)elisa试剂盒操作步骤:

1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30 分钟。

2. 分组:取出 96 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准

品组(6 个浓度)、空白孔、待测样品组。

注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

3. 加样:依照标准品的顺序分别加入 100ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 100ul 的蒸馏水;其余微孔中加入

100ul 的待测样本。

4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 50ul 的酶标溶液(空白对照孔除外)。

5. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。

6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置 15-30s,充分清洗酶标板 5 次,用吸水纸彻底拍干。

7. 显色:各孔加入显色剂 A 液 50ul 后,再加入显色剂 B 液 50ul。

8. 终止:25-37℃下避光反应 10-15 分钟,加入 50ul 终止液。

9. 读板:在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。

注意事项:

1. 实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。

2. 加样:加样时,要控制加样速度,避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响

实验的准确性以及重复性。

3. 孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

4. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。

5. 建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。

6. 建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商联系,

如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。

安全性

1. 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2. 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

大鼠生长激素释放多肽(GHRP)elisa试剂盒保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8℃

2.有效期:6个月

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